Abstract:

目的 通过生物信息学分析及动物实验探讨益气活血祛风除湿方（YHQCD）治疗自身免疫性葡萄膜炎 （AU）的作用机制。方法 （1）从 GEO 数据库下载 GSE66936 数据集，筛选健康者与 AU 患者的显著差异表达基 因（DEGs），通过 Metascape 数据库对显著 DEGs 进行基因本体论（GO）功能及京都基因与基因组百科全书 （KEGG）通路富集分析。（2）采用皮下注射含有光感受器间维生素 A 结合蛋白（IRBP）的乳糜剂诱导实验性 AU 模 型。将 60 只 Lewis 大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松（DXM，5 mg·kg⁻¹）组及 YHQCD 低（8.20 g·kg⁻¹）、 高（16.40 g·kg⁻¹）剂量组，每组 12 只。各给药组大鼠灌胃相应浓度的药物，正常组与模型组大鼠均给予等量生 理盐水灌胃，连续灌胃给药 12 d。采用裂隙灯显微镜及 HE 染色法检测大鼠眼前节炎症及眼组织病理学改变； ELISA 法检测血清炎症因子（IL-10、IL-17、TNF-α、IL-1β）水平；免疫荧光法和 Western Blot 法检测 PI3K/ AKT 信号通路相关蛋白及 T 细胞标志物视黄酸相关孤儿受体 γ（t RORγt）和叉头状转录因子 P3（FOXP3）蛋白表 达水平。结果 （1）生物信息学结果显示，共筛选出健康者与 AU 患者显著 DEGs 126 个，其中差异倍数最大的 10 个基因分别是 PHLDA1、GIMAP5、CST7、TNF、IKK、IFIT3、CDC27、ANXA1、EIF4E、EMP1；显著 DEGs 主要富集于炎症反应、T 细胞分化、PI3K/AKT 等信号通路。（2）正常组大鼠虹膜血管无扩张、水肿及炎症 细胞浸润，视网膜结构完整。与正常组比较，模型组大鼠重度虹膜粘连，虹膜有明显的扩张和充血，睫状体肿 胀，视网膜结构紊乱及出现大量炎性细胞浸润，前房有大量纤维蛋白渗出，瞳孔缩小。与模型组比较，各给药 组大鼠炎性细胞浸润、血管舒张、虹膜血管充血和水肿程度减轻，视网膜组织结构较完整，眼部炎症减少。 （3）与正常组比较，模型组大鼠眼前节临床评分、组织病理评分及血清中 TNF-α、IL-17 和 IL-1β 水平升高（P＜ 0.01），IL-10 水平降低（P＜0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠眼前节临床评分、组织病理评分及血清中 TNF-α、IL-17 和 IL-1β 水平均降低（P＜0.01），IL-10 水平显著增加（P＜0.01）。（4）与正常组比较，模型组大 鼠眼组织中磷酸化蛋白（p-PI3K、p-AKT、p-mTOR）、RORγt 荧光强度增强及 p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、 p-mTOR/mTOR、RORγt 蛋白表达水平均明显升高（P＜0.01），FOXP3 荧光强度减弱及其蛋白表达水平降低 （P＜0.01）；与模型组相比，各给药组大鼠眼组织中 p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、RORγt 荧光强度减弱及 p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、RORγt 蛋白表达水平均明显降低（P＜0.01），FOXP3 荧光强度增 强及蛋白表达水平升高（P＜0.01）。结论 YHQCD 具有较好的治疗 AU 的作用，其机制可能与抑制 PI3K/AKT 信号通路激活，减少炎性因子分泌，恢复 Th17/Treg 细胞平衡相关。

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目的 基于脑和肌肉组织芳香烃受体核转运类似蛋白 1（Brain and Muscle Arnt-Like-1，BMAL1）介导抗 氧化应激探讨葛根素减轻 Aβ25-35诱导海马神经元凋亡的分子机制。方法 （1）采用网络药理学分析筛选葛根素 干预阿尔茨海默病（AD）昼夜节律紊乱的潜在作用靶点，构建蛋白互作（PPI）网络并进行 GO 功能及 KEGG 通路 富集分析。通过分子对接、分子动力学模拟及药物亲和力靶标稳定性（DARTS）测定实验来验证葛根素与昼夜 节律主控因子 BMAL1 蛋白结合的稳定性。（2）提取小鼠原代海马神经元，采用免疫荧光法鉴定原代神经元，并 通过流式细胞术检测原代神经元的细胞纯度。通过 Aβ25-35处理原代海马神经元 47 h，建立 AD 细胞模型。细胞 分组及干预：正常对照组、AD 模型组，以及葛根素低、中、高剂量组（原代细胞先给予葛根素 12、24、 48 µmol·L-1预处理 1 h 后，再给予 Aβ25-35诱导损伤 47 h）。采用 Western Blot 法检测细胞相关蛋白的表达水平； 检测细胞还原型谷胱甘肽（GSH）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）及过氧化氢酶（CAT）水平；TMRE 荧光探针法检 测细胞线粒体膜电位变化；流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧水平。结果 （1）共得到葛根素干预 AD 昼夜 节律紊乱的潜在作用靶点 86 个；20 个核心靶点与氧化应激发生、调控密切相关；潜在作用靶点涉及多条昼夜 节律、氧化应激及退行性病变相关信号通路；生物学过程集中于活性氧代谢过程、对氧化应激的反应、昼夜节 律、认知等部分；细胞组分集中于突触膜内、突触后膜、突触前膜等部分；分子功能集中于泛素连接酶、抗氧 化活性、蛋白磷酸酶结合等部分。分子模拟、分子对接、DARTS 实验均显示，葛根素能与 BMAL1 蛋白稳定结 合。（2）与正常对照组比较，AD 模型组细胞 BMAL1 蛋白表达量显著降低（P＜0.01）；活性氧水平显著升高（P＜ 0.01），GSH、T-SOD、CAT 水平及线粒体膜电位显著降低（P＜0.01）；细胞的总凋亡率显著升高（P＜0.01）， Bax 蛋白表达显著上调（P＜0.01），Bcl-2、PSD95、SYN 蛋白表达显著下调（P＜0.01）。与 AD 模型组比较，葛 根素中、高剂量组细胞 BMAL1 蛋白表达量显著升高（P＜0.01），活性氧水平显著降低（P＜0.01），GSH、CAT 水平及线粒体膜电位显著升高（P＜0.01），细胞的总凋亡率显著降低（P＜0.01），Bax 蛋白表达显著下调（P＜ 0.01），Bcl-2、PSD95、SYN 蛋白表达显著上调（P＜0.01），NRF2、HO-1 蛋白表达显著上调（P＜0.05，P＜ 0.01）；葛根素高剂量组细胞的 T-SOD 水平显著升高（P＜0.01）。结论 葛根素可通过 BMAL1 介导抗氧化应激 减轻 Aβ25-35诱导海马神经元凋亡，其作用机制可能与激活 BMAL1-NRF2/HO-1 通路相关。

Abstract:

目的 探讨丹酚酸 C 通过激活 PPARα 信号通路改善 db/db 小鼠脂质代谢紊乱的作用及分子机制。 方法 将 C57BLKS/J（db/db）小鼠随机分为 5 组，每组 10 只，分别为模型组（db/db 组）、辛伐他汀组（阳性 对照药，10 mg·kg-1 ）、丹酚酸 C 低剂量组（5 mg·kg-1 ）、丹酚酸 C 中剂量组（10 mg·kg-1 ）和丹酚酸 C 高剂量组 （20 mg·kg-1 ）；另外，选取同窝 db/m 小鼠 10 只，作为正常对照组（db/m 组）。各给药组小鼠按照上述剂量灌胃 给予相应药物，每日 1 次，连续给药 8 周。检测小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固 醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平以及肝脏组织 TC、TG 含量。采用油红 O 染色法观察肝脏组 织中脂质蓄积情况。通过网络药理学方法筛选丹酚酸 C 干预脂质代谢紊乱的潜在作用靶点，并进行 GO 功能注 释及 KEGG 信号通路富集分析；Western Blot 法检测小鼠肝脏 PPARα、CPT1-α 及 PGC-1α 蛋白表达水平； qPCR 法检测小鼠肝脏 PPARα、ACOX1、CPT1- α、PGC-1α、SREBP-1、ACC、FABP-1、ADIPOR、ACO mRNA 表达水平；构建丹酚酸 C 干预脂质代谢紊乱的潜在作用靶点蛋白互作（PPI）网络，筛选 PPARα 通路上 游潜在核心靶点，并与丹酚酸 C 进行分子对接验证。结果 （1）动物实验研究：与正常对照组比较，模型组小 鼠的血清 TC、TG 及 LDL-C 水平均显著升高（P＜0.01），HDL-C 水平显著降低（P＜0.01）；肝脏组织可见明显 的脂质蓄积，脂滴阳性面积显著增加（P＜0.01），肝脏组织 TC、TG 水平显著升高（P＜0.01）；肝脏组织 PPARα、CPT1-α、PGC-1α 蛋白水平明显降低（P＜0.05）；肝脏组织中与脂肪酸 β-氧化、转运及线粒体转运过 程相关的 PPARα、ACOX1、CPT1-α、PGC-1α、FABP-1、ADIPOR、ACO mRNA 表达水平均显著下降（P＜ 0.01），与脂质合成相关的 SREBP-1、ACC mRNA 表达水平显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，丹酚酸 C 中、 高剂量组小鼠的血清 TC、TG、LDL-C 水平显著降低（P＜0.05、P＜0.01），肝脏脂滴阳性面积显著减少（P＜ 0.05，P＜0.01），肝脏组织 TC、TG 水平显著降低（P＜0.01），PPARα、CPT1-α、PGC-1α、FABP-1、ACO mRNA 表达水平均显著上调（P＜0.01），ACC mRNA 表达水平显著下调（P＜0.01）；丹酚酸 C 高剂量组小鼠的血 清 HDL-C 水平明显升高（P＜0.05），肝脏组织 PPARα、CPT1-α、PGC-1α 蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）， ACOX1、ADIPOR mRNA 表达水平显著上调（P＜0.01），SREBP-1 mRNA 表达水平显著下调（P＜0.01）。（2）网络 药理学分析：得到丹酚酸 C 干预脂质代谢紊乱的潜在作用靶点 75 个，主要参与脂肪酸代谢、类固醇代谢等脂 质代谢相关生物学过程，PPAR 信号通路可能是丹酚酸 C 调节脂质代谢的关键通路之一。筛选得到 30 个核心 靶点，丹酚酸 C 可与 PPARα 通路上游关键调控蛋白靶点 FASN、NR3C1、RXRA 稳定结合，结合能分别为-10.2、 -8.4、-8.9 kcal·mol-1 。结论 丹酚酸 C 可通过激活 PPARα 信号通路，上调其下游关键因子 CPT1-α、PGC-1α 等的表达，促进脂肪酸 β-氧化及能量代谢，抑制肝脏脂质蓄积，从而改善 db/db 小鼠脂质代谢紊乱状态。

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目的 基于沉默信息调节因子 1（SIRT1）/叉头框蛋白 O3A（FOXO3A）信号通路调控线粒体自噬探究仙鹤 草对小鼠心肌纤维化（MF）的作用及机制。方法 将雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、普萘洛尔组 （40 mg·kg-1 ）及仙鹤草低、中、高剂量组（生药量 0.78、1.56、3.12 g·kg-1 ），每组 10 只。采用皮下注射异丙肾 上腺素（ISO，15 mg·kg-1 ）14 d 复制 MF 小鼠模型。造模同时各给药组灌胃给予相应药物（给药体积为 10 mL·kg-1 ）， 每日 1 次，连续 14 d。采用超声心动图检测小鼠心功能，记录左心室射血分数（EF）、左心室缩短分数（FS）、 左室收缩末期内径（LVESD）、左室舒张末期内径（LVEDD）等心功能指标；生化法及 ELISA 法检测血清心肌酶 ［肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶 MB（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）］ 及胶原代谢物 ［Ⅰ型前胶原 C 端前肽 （PICP）、Ⅰ型胶原羧基端末肽（ICTP）］ 水平；HE 及天狼星红染色法观察心脏组织病理形态与胶原沉积情况； 流式细胞术检测心肌细胞线粒体膜电位；免疫荧光、免疫组化及 Western Blot 法检测心肌组织 SIRT1/FOXO3A 信号通路及自噬相关蛋白的表达情况。结果 与正常组比较，模型组小鼠的 EF、FS 显著降低（P＜0.01）， LVESD、LVEDD 显著升高（P＜0.01）；血清 CK、CK-MB、LDH、ICTP 及 PICP 含量或活性均显著升高（P＜ 0.01）；心肌纤维断裂，伴有部分炎性细胞浸润，胶原沉积显著增多（P＜0.01）；心肌细胞线粒体膜电位显著降 低（P＜0.01）；心脏组织中 LC3B 与 COXIV蛋白共定位表达显著增加（P＜0.01）；心脏组织 FOXO3A 在核内表达 增加，SIRT1、FOXO3A、BNIP3、LC3B、Beclin1、collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表达显著上调（P＜0.01），p62 蛋 白表达显著下调（P＜0.01）。与模型组比较，仙鹤草各剂量组小鼠的 EF、FS 显著升高（P＜0.01），LVESD、 LVEDD 显著降低（P＜0.01）；血清 CK、CK-MB、LDH、ICTP 及 PICP 含量或活性均显著降低（P＜0.01）；心肌 纤维化有所改善，炎性细胞浸润明显减轻，胶原沉积显著减少（P＜0.01）；心脏组织中 LC3B 与 COXIV蛋白的 共定位表达显著减弱（P＜0.05，P＜0.01）；心脏组织 FOXO3A 在核内表达减少，SIRT1、FOXO3A、BNIP3、 LC3B、Beclin1、collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表达显著下调（P＜0.05，P＜0.01）。与模型组比较，仙鹤草中、高 剂量组小鼠心脏组织 p62 蛋白表达显著上调（P＜0.05，P＜0.01），心肌细胞线粒体膜电位显著升高（P＜0.05， P＜0.01）。结论 仙鹤草可以改善 MF 小鼠的心功能和心肌损伤，减少心肌胶原沉积，改善纤维化，其作用机 制可能与抑制 SIRT1/FOXO3A 信号通路，调节线粒体自噬有关。

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目的 基于 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）信号通路探讨加味通络方含药血清对大鼠原代皮层神经元氧糖剥 夺/复氧（OGD/R）损伤的作用机制。方法 利用胎鼠分离、培养大鼠原代皮层神经元；利用大鼠制备加味通络 方含药血清及空白血清；神经元 OGD 处理 6 h 后，进行复氧 12 h 或 24 h，复制 OGD/R 细胞模型。将大鼠原 代皮层神经元随机分为：空白对照组、含药血清组、OGD6 h/R12 h 组、OGD6 h/R12 h+含药血清组、OGD6 h/ R12 h+抑制剂组、OGD6 h/R12 h+联合组、OGD6 h/R24 h 组、OGD6 h/R24 h+含药血清组。OGD 处理前 1 h， 空白对照组加入 10% 空白血清；含药血清组加入 10% 加味通络方含药血清；抑制剂组加入 20 µmol·L-1 SP600125（JNK 通路抑制剂，溶于 DMSO，终浓度＜0.1%）；联合组加入 10% 含药血清+20 µmol·L-1 SP600125。 采用免疫细胞化学/免疫荧光法（ICC-IF）检测细胞巢蛋白（Nestin）表达水平；CCK-8 法测定细胞增殖率；Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡率；qRT-PCR 法检测细胞 MAPK8、JUN、Bcl-2、Fas、Caspase-3 基因表达水平； Western Blot 法检测细胞 JNK、p-JNK、c-Jun、Fas、Cleaved-Caspase-3、Bcl-2 蛋白表达水平。结果 （1）与 空白对照组比较，含药血清组细胞的 Nestin 荧光表达强度及细胞增殖率显著升高（P＜0.05，P＜0.01），细胞凋 亡率无明显变化（P＞0.05）；OGD6 h/R12 h 组、OGD6 h/R24 h 组细胞的 Nestin 荧光表达强度及细胞增殖率显 著下降（P＜0.01），细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）；OGD6 h/R12 h 组细胞 p-JNK、c-Jun、Fas、CleavedCaspase-3 蛋白表达均显著上调（P＜0.01），Bcl-2 蛋白表达显著下调（P＜0.01），MAPK8、JUN、Fas、Caspase-3 mRNA 表达均显著上调（P＜0.01），Bcl-2 mRNA 表达显著下调（P＜0.01）。（2）与相同时间点模型组比较， OGD6 h/R12 h+含药血清组、OGD6 h/R12 h+抑制剂组、OGD6 h/R24 h+含药血清组细胞的 Nestin 荧光表达强度 及细胞增殖率均显著升高（P＜0.01），细胞凋亡率显著降低（P＜0.01）；OGD6 h/R12 h+含药血清组、OGD6 h/ R12 h+抑制剂组细胞 p-JNK、c-Jun、Fas、Cleaved-Caspase-3 蛋白表达均显著下调（P＜0.01），Bcl-2 蛋白表 达显著上调（P＜0.01），MAPK8、JUN、Fas mRNA 表达均显著下调（P＜0.01），Bcl-2 mRNA 表达显著上调 （P＜0.01）；OGD6 h/R12 h+含药血清组细胞 Caspase-3 mRNA 表达明显上调（P＜0.05），OGD6 h/R12 h+抑制剂 组细胞 Caspase-3 mRNA 表达显著下调（P＜0.01）。（3）与 OGD6 h/R12 h+含药血清组或 OGD6 h/R12 h+抑制剂组 比较，OGD6 h/R12 h+联合组细胞的 Nestin 荧光表达强度及细胞增殖率均显著升高（P＜0.01），细胞凋亡率显 著降低（P＜0.01）；细胞 p-JNK、c-Jun、Fas、Cleaved-Caspase-3 蛋白表达均显著下调（P＜0.01），Bcl-2 蛋白 表达显著上调（P＜0.01），MAPK8、JUN、Fas、Caspase-3 mRNA 表达均显著下调（P＜0.01），Bcl-2 mRNA 表 达显著上调（P＜0.01）。（4）与 OGD6 h/R12 h 组比较，OGD6 h/R24 h 组细胞的 Nestin 荧光表达强度及细胞增殖 率均无明显变化（P＞0.05），然而与 OGD6 h/R12 h+含药血清组比较，OGD6 h/R24 h+含药血清组的细胞增殖率 显著下降（P＜0.01）。结论 加味通络方含药血清对原代皮层神经元氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤具有保护作 用，其作用机制可能与抑制 JNK 信号通路的激活，调控凋亡相关蛋白及基因表达有关。

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目的 探讨伤科益肾壮骨丸调节 Hippo-Yes 相关蛋白（YAP）/PDZ 结合转录共激活因子（TAZ）通路对膝骨 关节炎（KOA）大鼠软骨形态的影响。方法 将 SD 大鼠随机分为假手术组、模型组、模型+伤科益肾壮骨丸 （0.5 g·kg-1 ）组、模型+伤科益肾壮骨丸+si-NC 组和模型+伤科益肾壮骨丸+si-LATS 组，每组 8 只大鼠。进行大鼠 膝骨关节软骨形态观察；番红 O-固绿染色观察膝骨关节软骨组织形态；TUNEL 实验检测软骨细胞凋亡情况； 免疫组织化学染色检测 p-YAP1 表达情况；Western Blot 实验检测细胞外基质和 Hippo-YAP/TAZ 通路相关蛋白 表达。结果 与假手术组比较，模型组膝骨关节软骨呈浅黄色，关节面粗糙，出现溃烂斑点和骨赘，软骨组织 中番红 O 淡染，TUNEL 阳性率和 MMP13 表达明显升高（P＜0.05），聚集蛋白聚糖（ACAN）、抗体Ⅱ型胶原 α1 链（COL2A1）、p-大型肿瘤抑制激酶 1/2（p-LATS1/2）、p-YAP1 和 TAZ 表达明显降低（P＜0.05）；与模型组比 较，模型+伤科益肾壮骨丸组及模型+伤科益肾壮骨丸+si-NC 组膝骨关节软骨呈乳白色，关节面光滑、无裂纹、 无骨赘，软骨组织红染，TUNEL 阳性率和 MMP13 表达明显降低（P＜0.05），ACAN、COL2A1、p-LATS1/2、 p-YAP1 和 TAZ 表达明显升高（P＜0.05），且模型+伤科益肾壮骨丸组与模型+伤科益肾壮骨丸+si-NC 组的差异 无统计学意义（P＞0.05）；与模型+伤科益肾壮骨丸+si-NC 组比较，模型+伤科益肾壮骨丸+si-LATS 组膝骨关节 软骨呈浅黄色，关节面粗糙、溃烂，番红 O 淡染，TUNEL 阳性率和 MMP13 表达明显升高（P＜0.05），ACAN、 COL2A1、p-LATS1/2、p-YAP1 和 TAZ 表达明显降低（P＜0.05）。结论 伤科益肾壮骨丸可能通过调控 HippoYAP/TAZ 通路中关键蛋白的表达，维持软骨正常形态和细胞外基质平衡，缓解膝骨关节炎大鼠膝骨关节软骨 退化及损伤。

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目的 探讨青葙苷Ⅰ通过活性氧（ROS）介导核因子 κB p65（NF-κB p65）/核苷酸结合寡聚化结构域样受 体蛋白 3（NLRP3）/胱天蛋白酶Ⅰ（Caspase-1）信号通路抑制视神经损伤模型视神经节细胞焦亡的机制。方法 选 取无特定病原体动物（SPF）健康雄性新西兰大白兔 24 只，随机分为假手术组、模型组、甲钴胺组以及青葙苷 Ⅰ组，每组 6 只。假手术组仅切开球结膜，其余 3 组复制视神经损伤模型。假手术组与模型组均给予等体积双 蒸水灌胃，甲钴胺组给予浓度 0.15 mg·kg-1甲钴胺水溶液灌胃，青葙苷Ⅰ组给予浓度 30 mg·kg-1青葙苷Ⅰ水溶 液灌胃，每日给药一次，连续给药 28 d。给药结束后采用耳鼻喉科内窥镜检测各组给药后眼底情况；苏木精- 伊红染色法（HE）观察各组视网膜情况；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测各组 视网膜节细胞凋亡情况；免疫荧光（IF）法检测视网膜组织 ROS、NF-κB、NLRP3 及 Caspase-1 的荧光表达；免 疫印迹法（Western Blot）法检测 ROS、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、焦孔素 D（GSDMD）蛋白表达；采用透 视电镜扫描检测各组焦亡小体数量。结果 与模型组比较，甲钴胺组与青葙苷Ⅰ组视网膜凋亡指数降低（P＜ 0.05）；与甲钴胺组比较，青葙苷Ⅰ组视网膜凋亡指数降低（P＜0.05）。免疫荧光结果显示，与假手术组比较， 模型组视网膜组织 ROS、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 蛋白表达升高（P＜0.05）；与模型组比较，甲钴胺组 与青葙苷Ⅰ组视网膜组织 ROS、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 蛋白表达降低（P＜0.05）；与甲钴胺组比较， 青葙苷Ⅰ组视网膜组织 ROS、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 蛋白表达较低（P＜0.05）。Western Blot 结果显 示，与假手术组比较，模型组视网膜组织 ROS、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白表达升高（P＜ 0.05）；与模型组比较，甲钴胺组与青葙苷Ⅰ组视网膜组织 ROS、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋 白表达降低（P＜0.05）；与甲钴胺组比较，青葙苷Ⅰ组视网膜组织 ROS、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、 GSDMD 蛋白表达较低（P＜0.05）；与假手术组比较，模型组节细胞焦亡小体数量明显增多（P＜0.05）。与模型 组比较，甲钴胺组与青葙苷Ⅰ组焦亡小体数量减少（P＜0.05）；与甲钴胺组比较，青葙苷Ⅰ组焦亡小体数量 减少（P＜0.05）。结论 青葙苷Ⅰ可以抑制 ROS 的产生，抑制 NF-κB p65/NLRP3/Caspase-1 信号通路，减少 GSDMD 的分解释放，进而减少视神经节细胞的焦亡发生，减轻视神经损伤，延缓视力损失。

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目的 基于网络药理学及分子对接技术，研究藏医药经典名方五味甘露药浴组方治疗银屑病的关键靶点 及作用通路，并通过细胞实验验证有关结果。方法 运用超临界 CO2萃取藏药五味甘露药浴组方药材细叶亚 菊 、 烈 香杜鹃、刺柏、水柏枝、麻黄的精油，用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）进行成分鉴别；利用 SwissTargetPrediction 等数据库筛选出关键成分及其靶点，从人类在线孟德尔遗传蛋白-蛋白相互作用（OMIM） 等数据库获取银屑病相关靶点，取交集后进行蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络构建及基因本体（GO）分析和基因 组百科全书（KEGG）信号通路富集分析；采用 Autodock 等软件对核心成分和关键靶点进行分子对接验证。最 后，通过体外细胞实验对预测结果进行验证，以脂多糖（LPS）诱导人永生化角质形成细胞（HaCaT）构建银屑病 炎症模型，细胞计数试剂盒 8（CCK-8）法确定安全给药浓度，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测桃柁酚、反式- 橙花叔醇、醋酸桔梗、柳杉二醇对炎症因子白细胞介素 17（IL-17）、白细胞介素 23（IL-23）、白细胞介素 6（IL-6）、 干扰素 γ（IFN-γ）的调控作用。结果 GC-MS 鉴定的 174 个化合物经皮肤渗透系数（log Kp ）≥-6 cm·s-1筛选获得 42 个关键成分；获得 109 个药物-疾病交集靶点。PPI 网络和药物-成分-疾病-靶点网络筛选出信号转导和转 录激活因子 3（STAT3）、Janus 激酶 2（JAK2）、Janus 激酶 1（JAK1）、B 细胞淋巴瘤 2（BCL2）、表皮生长因子受 体（EGFR）等 7 个核心靶点，与桃柁酚、反式-橙花叔醇、醋酸桔梗、柳杉二醇、乙酸-（4-苯基）-2-丁酯等核 心成分相互作用，主要涉及细胞增殖凋亡、免疫调节及炎症反应通路。分子对接表明桃柁酚与 EGFR 和 JAK1、 BCL2 具有强结合能力。细胞实验验证发现，各成分在 20 µg·mL-1 浓度下均无细胞毒性，能明显抑制 IL-17、 IL-23 和 IFN-γ 的分泌（P＜0.01）；在 IL-6 抑制方面，醋酸桔梗及柳杉二醇作用明显（P＜0.01），桃柁酚效果 显著（P＜0.05），证实这些成分可通过多靶点抑制银屑病相关炎症因子表达。结论 藏药五味甘露药浴组方 因疗效良好成为藏医临床常见治疗银屑病的外治方法。通过“成分-靶点-通路”多维分析及实验验证发现， 其核心活性成分通过靶向 STAT3、JAK1 等关键靶点，主要经 JAK-STAT 信号通路，抑制 IL-17、IL-23、IFN-γ 等特征性炎症因子的表达，从而发挥抗炎与免疫调节作用。这从现代药理学角度阐明了其通过“黄水-皮肤- 银屑”路径发挥治疗作用的具体分子机制，为揭示五味甘露药浴组方治疗皮肤病的科学内涵提供了依据。

Abstract:

目的 基于网络药理学和实验验证，探讨化痰活血解毒方治疗动脉粥样硬化潜在的作用机制。方法 网 络药理学部分：通过 TCMSP 数据库、文献数据库及 DisGeNET 数据库，预测并筛选化痰活血解毒方的有效成 分、相关靶点及动脉粥样硬化的相关靶点；利用 Venny2.1.0 平台获取化痰活血解毒方治疗动脉粥样硬化的核 心靶点，并基于 Metascape 数据库进行 GO 和 KEGG 富集分析，利用 STRING 数据库构建蛋白质相互作用网络， 利用 Cytoscape 3.8.2 软件构建“药物-有效成分-核心靶点”和“信号通路-核心靶点-有效成分”网络；并根据 分析结果，进行分子对接验证。动物实验部分：选取 20 只 ApoE-/-小鼠，随机分为模型组和化痰活血解毒方 组，每组 10 只。模型组及化痰活血解毒方组均给予 16 周高脂饲料喂养，从第 9 周起化痰活血解毒方组连续灌 胃化痰活血解毒方 8 周，模型组予生理盐水灌胃 8 周。正常组选取 10 只 C57BL/6J 小鼠，普通饲料喂养 16 周， 从第 9 周起予生理盐水灌胃。各组灌胃结束后取材，大体油红 O 染色观察主动脉脂质沉积情况；HE 染色观察 颈动脉斑块面积；ELISA 法检测各组血清中 TNF-α、IL-6、IL-1β 及 AGEs 的水平；Western Blot 法检测颈动 脉中 p-P65/P65、RAGE 的蛋白表达水平。结果 网络药理学部分：通过筛选发现化痰活血解毒方共有 79 个有 效成分、1 486 个相关靶点，动脉粥样硬化有 239 个相关靶点；取交集得到核心靶点 70 个，GO 与 KEGG 富集 分析发现 45 个细胞组分、1 376 个生物学过程、88 个分子功能，239 个 KEGG 信号通路；通过分子对接验证发 现，15 组“关键成分-关键靶点”的结合能均小于 0 kcal·mol-1 ，说明关键成分与关键靶点间有很好的亲和力。动 物实验验证部分：化痰活血解毒方可减少小鼠颈动脉斑块面积，降低主动脉脂质沉积，降低血清中 TNF-α、 IL-6、IL-1β 及 AGEs 水平（P＜0.01，P＜0.001，P＜0.000 1），抑制 p-P65/P65、RAGE 的蛋白表达（P＜0.05， P＜0.000 1），从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。结论 化痰活血解毒方可通过多成分、多靶点共同参与的形 式，抑制 AGE-RAGE/NF-κB 信号通路，从而调控炎症反应，发挥抗动脉粥样硬化的作用。

Abstract:

目的 探讨芪七连方治疗高血压的分子机制。方法 以超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）测定 芪七连方的成分；以 SWISS ADME 和 SWISS Target Prediction 数据库预测其活性成分及靶点；从 DisGeNET、 DrugBank、GeneCards、OMIM、TTD 数据库获取高血压病基因靶点；将活性成分靶点与高血压病基因靶点取交 集；将交集靶点导入 STRING 数据库预测蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，再使用 Cytoscape 3.9.1 的 cytoHubba 插件 MCC 模式取前 5 位作为核心基因；用 Metascape 数据库进行 GO 分析和 KEGG 通路富集分析； 选取核心活性成分与核心基因进行分子对接验证结合活性。 结果 共获得芪七连方 65 种活性成分和 803 个靶 点，1 304 个高血压基因靶点。芪七连方的核心成分为木兰花碱、柚皮素、槲皮素-3-甲基醚、异鼠李素，其 治疗高血压的核心靶点是 STAT3、PTPN11、JAK1 等；芪七连方通过脂质与动脉粥样硬化、PI3K/Akt 信号通路、 AGE-RAGE 信号通路等信号通路调控高血压，分子对接结果显示核心成分和核心靶点的结合能≤-5.0 kcal·mol-1 ， 表明结合效果良好。结论 芪七连方通过多成分、多靶点、多通路防治高血压。

Abstract:

目的 利用生物信息学及机器学习方法探究黄芪甲苷治疗扩张型心肌病（DCM）的分子机制。方法 从 高通量基因表达数据库（GEO）获取 DCM 转录组数据集（GSE9800、GSE29819），筛选显著差异表达基因 （DEGs）。基于 ChEMBL、SwissTargetPrediction、PharmMapper 和 Comparative Toxicogenomics Database 数据库系 统筛选黄芪甲苷的作用靶点，对 DEGs 与黄芪甲苷的预测靶点取交集，交集靶点即为黄芪甲苷治疗 DCM 的潜 在作用靶点。对潜在作用靶点通过 GO 功能注释与 KEGG 通路富集分析其涉及的生物学过程和信号通路。构建 127 种机器学习模型识别特征基因，并应用沙普利值加法解释算法（SHAP）评价靶点特征重要性。利用受试者 工作特征曲线（ROC）评估特征基因的疾病状态预测效能，并进行外部验证。使用分子对接技术分析黄芪甲苷与 特征基因的结合活性，并对高亲和力基因进一步实施孟德尔随机化（MR）因果推断验证。结果 共筛选出黄芪 甲苷潜在作用靶点 296 个，DCM 的 DEGs 959 个，得到 25 个交集靶点。GO 分析显示，交集靶点主要参与氨 酸型肽酶活性、丝氨酸水解酶活性、血压调节、激素代谢、血小板活性等生物学功能。KEGG 分析显示，交集 靶点主要参与细胞色素 P450 相关通路、钙信号通路、酪氨酸代谢、脂肪酸降解、丙酮酸代谢、糖酵解/糖异 生、肾素-血管紧张素系统（RAS）、冠状病毒病（COVID-19）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路、环磷酸 鸟苷-蛋白激酶 G（cGMP-PKG）信号通路等。基于机器学习算法进一步筛选出 10 个特征基因（BMP7、NPR3、 ADRB1、SLC37A4、FAP、CA12、DPP9、CRAT、PTPN22 及 DAPK1）。ROC 分析证实，所有特征基因对 DCM 均有良好的预测能力，且外部验证具有显著组间差异（P＜0.05）。分子对接显示，肉碱乙酰转移酶（CRAT）、死 亡相关蛋白激酶 1（DAPK1）、β1 肾上腺素能受体（ADRB1）与黄芪甲苷的结合能均＜-10 kcal·mol-1 ，表明存在 高亲和力结合。MR 分析显示，CRAT、DAPK1 与 DCM 存在显著因果关联（P＜0.05）。结论 黄芪甲苷可能通 过调控代谢重编程、维持钙稳态及干预神经内分泌通路等多途径发挥对 DCM 的心脏保护作用，其中 CRAT、 DAPK1 为其关键作用靶点，可为阐明 DCM 发病机制及创新药物研发提供分子依据。

Abstract:

目的 基于长链非编码 RNA（lncRNA）/mRNA 表达谱探讨橘红胎配方颗粒治疗慢性支气管炎（CB）的作用 机制。方法 将 18 只 SD 大鼠随机分为空白组、模型组、橘红胎配方颗粒组（3.15 g·kg-1 ），每组 6 只。在第 2、 6、13、19、23、29 天，空白组大鼠气管滴注 200 µL 生理盐水，模型组和橘红胎配方颗粒组大鼠气管滴注 200 µL 脂多糖（1 µg·µL-1 ）复制 CB 模型；其余时间橘红胎配方颗粒组大鼠给予橘红胎配方颗粒溶液灌胃，空 白组、模型组大鼠灌胃等体积生理盐水，每天灌胃 1 次，连续干预 30 d。采用 HE 法观察大鼠肺组织病理改 变；ELISA 法检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素 6（IL-6）水平。采 用高通量测序技术（HTC）对空白组、模型组、橘红胎配方颗粒组大鼠肺组织的 lncRNA/mRNA 表达谱进行分 析，筛选关键调节基因，并进行 GO 功能和 KEGG 通路富集分析。结果 （1）与空白组比较，模型组大鼠气管 壁明显增厚，部分肺泡不规则扩大并融合形成肺大泡，支气管管腔内可见不同程度的炎性细胞浸润，有明显出 血点；与模型组比较，橘红胎配方颗粒组大鼠支气管黏膜上皮、管壁较为完整，肺泡壁塌陷较少，出血及炎性 细胞浸润程度减轻。（2）与空白组比较，模型组大鼠肺组织病理评分及血清、BALF 中 TNF-α、IL-6 水平显著升 高（P＜0.01）；与模型组比较，橘红胎配方颗粒组大鼠肺组织病理评分及血清、BALF 中 TNF-α、IL-6 水平显 著降低（P＜0.01）。（3）测序结果显示，橘红胎配方颗粒治疗 CB 的关键调节基因共有 54 个，较模型组上调基 因 26 个（包括 Myrip、Mtcl1、Chrd、Gpr17、Trim54 等），下调基因 28 个（包括 Gcsam、Mir146a、Top2a、 Cemip、Mki67 等）。关键调节基因主要涉及原发性免疫缺陷和 TGF-β 信号通路。结论 橘红胎配方颗粒可降 低 CB 大鼠 TNF-α、IL-6 水平，抑制炎症反应，改善肺部病理损伤，其机制可能与调控 Myrip、Mir146a、 Blnk、Icos、Chrd、Lrrc32 等基因表达，从而调节原发性免疫缺陷和 TGF-β 信号通路有关。

Abstract:

岭南医学是基于岭南独特地理气候环境及人群体质形成的中医重要地域流派。本文系统梳理其“融汇创 新、重验务实”的学术思想，深入剖析以“湿热”为核心的病理基础，并系统阐述了岭南中药“食药两用、温 和清解、芳香辟秽、草根藤木、蒸制调和”五大特点。提炼出岭南临床用药以“清热祛湿、运脾和中”为核 心，善用芳香药物辟秽，强调“攻邪不忘扶正”，并灵活运用道地“南药”资源的规律。横向对比川派、浙派 医学，展现了岭南“清热祛湿、健脾和中”的用药特色。通过数据挖掘分析岭南高发疾病慢性咳嗽的用药规 律，实证了其用药在遵循中医普遍法则的同时，融合了健脾祛湿、温和清解、扶正祛邪等地域特色。本研究为 岭南医学的传承创新、岭南道地药材开发及区域性疾病防治提供了理论依据与临床参考。

Abstract:

胃癌前病变（gastric precancerous lesions，GPL）是胃癌二级预防的核心环节，构建可靠的动物模型对其机 制研究和干预评价具有重要意义。本文基于文献数据挖掘，对现有 GPL 动物模型构建方法与应用进行了系统 综述。目前的 GPL 动物模型多选用雄性 Wistar 及 SD 大鼠，以复合诱导法为主流，造模周期集中于 10、12、 16 周；评价体系涵盖病理、炎症等多维度指标。模型应用集中于机制探讨与疗效验证，中西医干预措施各有 侧重。现有模型虽能模拟关键病理特征，但仍存在标准化不足、评价体系不完善及中西医结合模型缺乏等问 题。未来需推动建模与评价标准化，构建更贴近临床病程与病证特点的 GPL 动物模型，为 GPL 的防治研究提 供支撑。

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目的 建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定唇齿清胃丸中大黄酚、黄芩苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、栀子 苷、龙胆苦苷 6 种成分的含量。方法 采用 CAPCELL PAK-C18 色谱柱（250 mm × 4.6 mm，5 µm），以甲醇- 0.1% 磷酸为流动相进行梯度洗脱；流速为 1.0 mL·min-1 ；柱温为 30 ℃；切换波长（240、280 、254 nm）；进样 量为 10 µL，同步测定唇齿清胃丸中大黄酚、黄芩苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、栀子苷、龙胆苦苷 6 种成分的含 量。结果 唇齿清胃丸中龙胆苦苷、栀子苷、盐酸小檗碱、橙皮苷、黄芩苷、大黄酚的质量浓度分别在 5.79～ 57.92、7.44～74.40、4.07～40.74、5.62～56.15、11.97～119.67、1.73～17.32 µg·mL-1 范围内与其峰面积呈良 好的线性关系（r≥0.999 5）；各成分平均加样回收率范围为 98.62%～102.28%，RSD 范围为 1.09%～2.26%；中 间精密度、稳定性、重复性和耐受性良好，RSD 均＜3.0%。15 批唇齿清胃丸样品中龙胆苦苷、栀子苷、盐酸 小檗碱、橙皮苷、黄芩苷、大黄酚 6 个成分含量范围分别为 2.343～3.736、4.160～5.612、2.161～2.996、2.478～ 4.138、6.847～8.804、0.606～0.856 mg·g-1 。结论 本测定方法简单、准确，可用于唇齿清胃丸的质量控制与 综合评价。

Abstract:

目的 基于数据挖掘结合网络药理学方法探究国家专利中药复方治疗胃食管反流病（GERD）的组方规律 及作用机制。方法 （1）检索国家知识产权局专利数据库中治疗 GERD 的专利中药复方，并建立标准化数据 库。通过 Microsoft Excel 2021 软件对标准化数据库中药物的使用频率、功效分类及性味归经分布情况进行描述 性统计分析；通过 IBM SPSS Modeler 18.0（Apriori 算法）和 IBM SPSS Statistics 26 软件对高频药物进行关联规则 挖掘与系统聚类分析；采用 R 语言中的 psych 包完成高频药物 Phi 相关性分析，以识别并筛选核心药物组合。 （2）基于中药系统药理学数据库获取核心药物的活性成分及其作用靶点。通过 GeneCards、OMIM、TTD 数据库 获取 GERD 疾病相关靶点。对核心药物作用靶点与疾病相关靶点进行映射，获得核心药物治疗 GERD 的潜在 作用靶点。运用 Cytoscape 3.9.1 软件构建“药物-成分-靶点”互作关系网络，筛选核心活性成分。将潜在作用 靶点导入 STRING 数据库，构建蛋白互作（PPI）网络，筛选核心靶点。对潜在作用靶点进行 GO 功能注释与 KEGG 通路富集分析。使用 AutoDock Vina 1.1.2 软件对核心活性成分与核心靶点进行分子对接验证。结果 （1）最 终共纳入 128 项专利中药复方，涵盖 444 味中药。其中高频用药（频数≥20 次）有黄连、柴胡、甘草、海螵蛸、 吴茱萸等；功效分类主要包括清热药、补虚药、理气药以及活血化瘀药等；药性以温性为主，药味以苦、辛、 甘味多见，主要归经为肝、胃、肺经。关联规则识别出赭石-枳壳-柴胡、赭石-吴茱萸-黄连等药物组合；聚 类分析获得黄连-吴茱萸-赭石-柴胡-枳壳-白芍等 5 类新聚类；Phi 相关性分析提示柴胡-枳壳-黄连-吴茱萸- 赭石组合的相关性较强，并确定柴胡-枳壳-黄连-吴茱萸为核心药物组合。（2）对“柴胡-枳壳-黄连-吴茱萸” 核心药物组合筛选获得 41 个药物活性成分，以及 216 个作用靶点；通过 GeneCards、OMIM、TTD 数据库检索 得到疾病相关靶点 1 244 个；将核心药物作用靶点与疾病相关靶点取交集，共获得核心药物治疗 GERD 的潜在 作用靶点 88 个。通过“药物-成分-靶点”网络分析得到核心药物治疗 GERD 的核心活性成分：槲皮素、山柰 酚、柚皮素、川陈皮素和异鼠李素。通过潜在作用靶点 PPI 网络分析得到核心药物治疗 GERD 的核心靶点： AKT1、MAPK3、PTGS2、MMP9、IL1B、BCL2、PPARG、CASP3、TNF、IL6、TP53。潜在作用靶点主要通过 影响凋亡信号通路的调节、上皮细胞增殖、对外源性刺激的反应、泛素样蛋白连接酶结合、蛋白激酶调节剂活 性及 DNA 结合转录因子结合等生物学过程；主要富集在 PI3K-Akt、MAPK、IL-17、Lipid and atherosclerosis 和 AGE-RAGE 等信号通路。5 个核心成分均能与 11 个核心靶点稳定结合，其中柚皮素与 MMP9、山柰酚与 PTGS2 的结合能最强。结论 GERD 专利中药复方以清热为主，兼以补虚、理气、活血为治则，其核心药物组 合“柴胡-枳壳-黄连-吴茱萸”可能是通过靶向调控 AKT1、MAPK3、PTGS2 等关键靶点，介导 PI3K-Akt、 MAPK、IL-17 等信号通路，从而发挥治疗 GERD 的作用。

Abstract:

前庭周围性眩晕是临床最常见的眩晕类型，具有高发病率、反复发作等特点，严重影响患者的日常生 活。前庭周围性眩晕疗效测评量表是前庭周围性眩晕临床诊疗与研究的重要工具，眩晕障碍量表（DHI）、平衡 信心量表（ABC）、Berg 平衡量表（BBS）等常用疗效测评工具普遍表现出较好的信效度[如 DHI 中文版克隆巴赫 系数（Cronbach's α）为 0.751～0.918，ABC 中文版 Cronbach's α 为 0.95]，但前庭眼动筛查（VOMS）等量表的信 效度研究仍较缺失。在最小临床重要差值（MCID）方面，DHI、ABC 及 BBS 量表的相关研究较多，但结果存在 较大差异，而眩晕症状量表（VSS）、前庭疾病日常生活量表（VADL）、前庭康复获益问卷（VRBQ）等量表尚未建 立明确的 MCID 阈值。现有核心量表在信效度层面总体可靠，但 MCID 结果存在缺失，部分量表关键指标证据 不足，需进一步完善。该文系统梳理了前庭周围性眩晕常用临床疗效测评工具的信度、效度及 MCID，分析前 庭周围性眩晕结局评价工具的研究现状，以期为前庭周围性眩晕的疗效评价工具及临床诊疗决策优化提供科学 依据。

Abstract:

地锦草为大戟科大戟属植物地锦 Euphorbia humifusa Willd. 的干燥全草，是蒙医常用药材之一。地锦草 含有黄酮类、酚酸类及萜类成分等多种化学成分，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、止血及保肝等 多种生物活性，有较高的药用开发价值。本研究在对地锦草的化学成分、药理作用及在蒙医复方制剂中的应用 进行系统整理和分析的基础上，结合质量标志物（Q-Marker）理念，从植物亲缘学和化学成分特有性、可测性、 药性、炮制方法以及复方配伍规律等方面预测分析了地锦草的潜在 Q-Marker。本研究初步提出槲皮素、木犀 草素、没食子酸、鞣花酸等黄酮及酚酸类成分可作为地锦草的 Q-Marker，为地锦草质量评价体系的建立及其 进一步开发利用奠定了研究基础。

Abstract:

甘蔗叶是禾本科甘蔗属植物甘蔗 Saccharum sinensis Roxb. 和 S.officinarum Linn. 的叶，是瑶族地区具有悠 久历史的民间药物。其化学成分主要包括黄酮类、有机酸类、木脂素类、萜类、糖类等，具有抗炎、抗氧化、 抑菌、抗肿瘤、降血糖、抗心肌梗死等多种药理作用。本研究基于甘蔗叶化学成分和药理作用的研究进展，从 质量传递与溯源、不同产地和采收时期、中药药性和中药药效、复方配伍环境、化学成分可测性等方面对甘蔗 叶质量标志物（Q-Marker）进行预测分析，初步预测出黄酮类（异荭草素、苜蓿素、芹菜素等）、有机酸类（没食 子酸、香草酸、咖啡酸等）、多糖类、β-谷甾醇、β-香树素、酞酸二甲酯、亚油酸甲酯等可作为甘蔗叶的主要 Q-Marker，可为完善甘蔗叶质量评价体系提供参考依据。