目的 探究枸杞多糖通过 MAP3K3 通路降低程序性死亡配体 1 （PD-L1） 表达从而抗肺腺癌的作用及其机 制。方法 （1） 体内实验：构建小鼠皮下肺腺癌移植瘤模型，观察枸杞多糖低、中、高 （25、50、100 mg·kg-1 ） 剂量用药对小鼠肿瘤生长及免疫器官的影响。 （2） 体外实验：枸杞多糖 0.25、0.5、1 mg·mL-1 处理 H1299、A549 细胞 48 h，CCK-8 法及平板克隆形成法检测各组细胞增殖情况，Western Blot 及 RT-qPCR 法检测各组 PD-L1 蛋白和 mRNA 表达水平；建立来自健康人外周血激活的 T 淋巴细胞 （PBMC） 与肺腺癌细胞共培养体系，观察枸 杞多糖用药前后对 PBMC 免疫杀伤作用的影响；1 mg·mL-1 枸杞多糖干预 H1299 细胞后进行转录组学测序，筛 选差异表达基因，并进行 KEGG 富集分析。以 Western Blot 和 RT-qPCR 法检测枸杞多糖用药后肺腺癌细胞 MAP3K3 蛋白和 mRNA 表达水平。 （3） 回复实验：构建 MAP3K3 过表达 A549 人肺腺癌细胞株 （A549 MAP3K3 OE） ，Western Blot 法检测枸杞多糖用药后其 PD-L1 蛋白表达情况，并观察 MAP3K3 基因过表达前后以及枸杞 多糖干预前后，PBMC 对肺腺癌细胞免疫杀伤功能的影响。结果 （1） 与对照组比较，枸杞多糖用药组瘤质量 明显下降 （P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001） ；肿瘤组织病理学观察发现细胞密度降低，间质淋巴细胞浸润增多； 枸杞多糖用药组免疫器官脾脏系数上升 （P＜0.05） 。 （2） 枸杞多糖处理人肺腺癌细胞 48 h 后细胞增殖活力无明显 变化 （P＞0.05） ；枸杞多糖用药后细胞 PD-L1 蛋白和 mRNA 表达水平均下降 （P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001） ； 枸杞多糖可增强激活的 PBMC 对肺腺癌细胞的免疫杀伤作用 （P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001） ；转录组学测序差 异基因主要富集在 MAPK 通路；枸杞多糖用药组细胞 MAP3K3 蛋白和 mRNA 表达水平下调 （P＜0.05，P＜ 0.01，P＜0.001）。 （3）A549 MAP3K3 OE 肺腺癌细胞中 PD-L1 高表达（P＜0.01）；共培养实验发现 A549 MAP3K3 OE 细胞对激活的 PBMC 免疫杀伤作用具有一定的抵抗性 （P＜0.001） ，而枸杞多糖干预后，可一定程 度恢复 PBMC 对 A549 MAP3K3 OE 细胞的杀伤敏感性 （P＜0.01，P＜0.001） 。结论 枸杞多糖通过下调肺腺癌 细胞 MAP3K3 基因及 PD-L1 表达，改善体外培养体系中激活 PBMC 的免疫杀伤功能，这可能是枸杞多糖抗肺 腺癌的作用机制之一。

Objective：This study aims to investigate the anti-lung adenocarcinoma effects and underlying mechanisms of Lycium barbarum polysaccharide （LBP） in suppressing PD-L1 expression via the MAP3K3 pathway. Methods （1） In vivo experiments：A subcutaneous lung adenocarcinoma xenograft model was established in mice to evaluate the effects of low-，medium-，and high-dose LBP （25，50，and 100 mg·kg-1 ） on tumor growth and immune organ indices. （2） In vitro experiments：H1299 and A549 cells were treated with LBP （0.25，0.5，and 1 mg·mL-1 ） for 48 hours. Cell proliferation was assessed using CCK-8 and colony formation assays，while PD-L1 protein and mRNA expression levels were measured via Western Blot and RT-qPCR. A co-culture system of activated peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） from healthy donors and lung adenocarcinoma cells was established to examine the immunomodulatory effects of LBP on PBMC-mediated tumor cell killing. Transcriptome sequencing was performed on H1299 cells treated with 1 mg·mL-1 LBP to identify differentially expressed genes （DEGs），followed by KEGG enrichment analysis. Western Blot and RT-qPCR were used to validate MAP3K3 expression changes in lung adenocarcinoma cells post-LBP treatment. （3） Rescue experiments：A MAP3K3-overexpressing A549 cell line （A549 MAP3K3 OE） was constructed. PD-L1 protein expression was assessed by Western Blot after LBP treatment， and the impact of MAP3K3 overexpression and LBP intervention on PBMC-mediated cytotoxicity was evaluated. Results （1） Compared with the control group，LBP treatment significantly reduced tumor weight （P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001） and decreased tumor cell density while increasing stromal lymphocyte infiltration. The spleen and thymus indices were elevated in LBP- treated mice （P＜0.05） . （2） LBP did not significantly alter the proliferation of lung adenocarcinoma cells after 48 h ours of treatment but downregulated PD-L1 protein and mRNA expression （P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001） . LBP enhanced the cytotoxic activity of activated PBMCs against lung adenocarcinoma cells （P＜0.05， P＜0.01， P＜0.001） . Transcriptome sequencing revealed DEGs primarily enriched in the MAPK pathway. MAP3K3 protein and mRNA expression levels were significantly downregulated in LBP-treated cells （P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001） . （3） A549 MAP3K3 OE cells exhibited elevated PD-L1 expression （P＜0.01） and resistance to PBMC-mediated killing （P＜ 0.001） . However，LBP treatment partially restored PBMC cytotoxicity against A549 MAP3K3 OE cells （P＜0.01，P＜ 0.001） . Conclusion LBP suppresses lung adenocarcinoma progression by downregulating MAP3K3 and PD-L1 expression，thereby enhancing PBMC-mediated immune cytotoxicity in vitro. This mechanism may contribute to the anti-tumor effects of LBP against lung adenocarcinoma.

R285.5

国家自然科学基金资助项目 （81873154）。