目的 观察益肾通络方（YSTLF）对肾小管上皮-间质转化（EMT）的影响，基于信号转导与转录激活因子3 （STAT3）筛选益肾通络方活性成分，并探讨其改善肾小管上皮细胞（HK-2）的EMT作用机制。方法 （1）采用高糖 诱导 HK-2 细胞，将 HK-2 细胞分为对照组、模型组、Stattic 组及 YSTLF 低（0.25 mg·mL-1）、中（0.5 mg·mL-1）、 高（1 mg·mL-1）剂量组，采用显微镜观察各组 HK-2细胞的形态学变化，利用划痕实验检测各组细胞迁移能力， 通过蛋白免疫印记法检测各组磷酸化信号转导和转录活化因子3（p-STAT3）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏 蛋白（N-cadherin）、纤连蛋白（FN）、波形蛋白（Vimentin）水平。（2）将293T细胞分为对照组、模型组、地黄苷D （RD） 组、银锻苷组、香橙素组、番泻苷 A 组、番泻苷 B组、（±）-甘草素组、D-果糖组、豆甾醇组、杨梅素 组、对香豆酸组、齐墩果酸组、原儿茶酸组、阿魏酸组，采用报告基因法检测各组 STAT3的相对荧光素酶活 力，并将有统计学差异的活性成分作用于 HK-2 细胞，采用蛋白免疫印记法进一步筛选 YSTLF 的活性成分。 （3）将 HK-2 细胞分为对照组、RD给药组（1.25、2.5、5、10、20 μmol·L-1）、银锻苷给药组（1.25、2.5、5、10、 20 μmol·L-1）、番泻苷 A 给药组（1.25、2.5、5、10、20 μmol·L-1）。通过细胞活力测定（MTT）检测活性成分 RD 对 HK-2 细胞存活率的影响；再将 HK-2 细胞分为对照组、模型组、Stattic 组、RD 给药组（1.25、2.5、5、10、 20 μmol·L-1），通过实时荧光定量PCR检测各组细胞KIM-1、NGAL mRNA水平，显 微 镜 观 察 细 胞 形 态 ， 划 痕 实 验 观 察 各 组 细 胞 迁 移 能 力 ， 蛋 白 免 疫 印 记 法 检 测 各 组 p-STAT3 、 E-cadherin、N-cadherin、FN、 Vimentin、细胞因子信号转导抑制因子1（SOCS1）、锌指结合蛋白1（ZEB1）蛋白水平。结果 （1）与对照组比较， 模 型 组 细 胞 形 态 呈 现 细 长 的 纺 锤 状 或 梭 形 ， 细 胞 迁 移 率 明 显 增 加（P＜0.01）， E-cadherin 明显降低 （P＜0.05），p-STAT3、N-cadherin、FN、Vimentin 表达升高（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）；与 模 型 组 比 较 ， Stittic 组 与 YSTLF 给 药 组 细 胞 形 态 逐 渐 呈 鹅 卵 石 样 ， E-cadherin 表达增多（P＜0.05）， 细 胞 迁 移 率 及 p-STAT3、N-cadherin、FN、Vimentin 表达降低（P＜0.01，P＜0.001）。（2）293T 细胞中，与对照组比较，模型 组荧光素酶活性值明显上升（P＜0.001）。与模型组相比，RD组、银锻苷组、番泻苷A组、D-果糖组、杨梅素组、 对香豆酸组、齐墩果酸组、阿魏酸组荧光素酶活性值降低（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）。HK-2 细胞中， 模型组 p-STAT3 水平明显上升（P＜0.01）；RD 组、银锻苷组、番泻苷 A 组 p-STAT3 表达降低（P＜0.01）。 （3）HK-2 细胞中，与对照组相比，银锻苷各给药组细胞活性降低（P＜0.001），番泻苷 A给药组细胞活性升高 （P＜0.001），RD 各给药组的差异无统计学意义（P＞0.05）。HK-2 细胞中，与对照组相比，模型组 KIM-1、 NGAL mRNA 水平及细胞迁移率升高（P＜0.001），p-STAT3、N-cadherin、FN、Vimentin、ZEB1 蛋白表达升高 （P＜0.05，P＜0.01），细胞形态逐渐呈鹅卵石状；与模型组相比，RD给药组（5、10、20 μmol·L-1）p-STAT3降低 （P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001），Stattic 组与 RD 给药组 KIM-1、 NGAL mRNA 水 平 及 细 胞 迁 移 率 下 降 （P＜0.05， P＜0.01， P＜0.001）， E-cadherin、 SOCS1、 p-STAT3、N-cadherin、FN、Vimentin、ZEB1 蛋白表达降低（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001），细胞形态逐渐恢复鹅卵石状。结论 YSTLF 及其活性成分 RD 能够 改善高糖诱导的HK-2细胞EMT，其作用机制与调节SOCS1、ZEB1蛋白有关。

Objective To investigate the effect of Yinshen Tonluo Formula （YSTLF）on epithelial-mesenchymal transition（EMT）of renal tubular epithelial cells. The active components of YSTLF were screened based on signal transducer and activator of transcription 3（STAT3），and the mechanism of improving EMT of renal tubular epithelial cells（HK-2）was explored. Methods （1）HK-2 cells were induced by high glucose，then HK-2 cells were divided into control group，model group，Stattic group and YSTLF low-（0.25 mg·mL-1），medium-（0.5 mg·mL-1）and high- （1 mg·mL-1）dose groups. The morphological changes of HK-2 cells in each group were observed by microscope. The cell migration ability of each group was detected by scratch test. The levels of phosphorylated signal transduction and transcriptional activation factor 3（p-STAT3）， E-cadherin， N-cadherin， fibronectin（FN）and Vimentin in each group were detected by Western Blot.（2）293T cells were divided into control group，model group，rehmannioside D （RD）group ，tiliroside group，dihydrokaempferol group，sennoside A group，sennoside B group，（±）-liquiritigenin group， D-fructose group， stigmasterol group， myricetin group， p-coumaric acid group， oleanolic acid group， protocatechuic acid group and ferulic acid group. The relative luciferase activity of STAT3 in each group was detected by reporter gene method， and the active components with statistical difference were applied to HK-2 cells. The active components of YSTLF were further screened by Western Blot.（3）HK-2 cells were divided into control group， RD administration group（1.25， 2.5， 5， 10， 20 μmol·L-1）， tiliroside administration group（1.25， 2.5， 5， 10， 20 μmol·L-1），sennoside A administration group（1.25，2.5，5，10，20 μmol·L-1）. The effect of active component RD on the survival rate of HK-2 cells was detected by MTT assay. Then HK-2 cells were divided into control group，model group，Stattic group，RD administration group（1.25，2.5，5，10，20 μmol·L-1）. The mRNA levels of KIM-1 and NGAL were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. The cell morphology was observed by microscope and the cell migration ability was observed by scratch test. The protein levels of p-STAT3，E-cadherin，N-cadherin，FN， Vimentin，suppressor of cytokine signaling 1（SOCS1）and zinc finger E-box binding protein 1（ZEB1）in each group were detected by Western Blotting. Results（1）Compared with the control group， the cell morphology of the model group was slender spindle or fusiform，the cell migration rate was significantly increased （P＜0.01）， E-cadherin was significantly decreased （P＜0.05）， and the expression of p-STAT3， N-cadherin， FN and Vimentin was increased（P＜0.05， P＜0.01， P＜0.001）. Compared with the model group， the cells of the Stittic group and the YSTLF group gradually exhibited cobblestone morphology，E-cadherin expression was increased（P＜0.05），the cell migration rate was decreased，and the expression of p-STAT3，N-cadherin，FN and Vimentin was decreased （P＜0.01，P＜0.001）.（2）In 293T cells，compared with the control group，the luciferase activity value of the model group increased significantly（P＜0.001）. In HK-2 cells，p-STAT3 level in the model group increased significantly （P＜0.01）. Compared with the model group， the luciferase activity values of RD group， tiliroside group， sennoside A group， D-fructose group， myricetin group， p-coumaric acid group， oleanolic acid group and ferulic acid group decreased（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）. In HK-2 cells，the expression of p-STAT3 in RD group， tiliroside group and sennoside A group decreased（P＜0.01）.（3）In HK-2 cells，compared with the control group，the cell activity of each tiliroside group was decreased（P＜0.001）， the cell activity of each sennoside A group was increased（P＜0.001），and there was no significant difference in each RD group（P＞0.05）. In HK-2 cells，compared with the control group， the mRNA levels of KIM-1 and NGAL， and the migration rate in the model group were increased（P＜0.001），the protein expression of p-STAT3，N-cadherin，FN，Vimentin and ZEB1 were increased （P＜0.05，P＜0.01），the cell morphology was gradually cobblestone-like. Compared with the model group，p-STAT3 was decreased in RD（5， 10， 20 μmol·L-1）administration group（P＜0.05， P＜0.01， P＜0.001）， KIM-1 and NGAL mRNA levels ， and the migration rate were decreased in Stattic group and RD administration group （P＜0.05， P＜0.01， P＜0.001）. The protein expression of E-cadherin， SOCS1， p-STAT3， N-cadherin， FN， Vimentin and ZEB1 were decreased （P＜0.05， P＜0.01， P＜0.001）， cell morphology gradually recovered to cobblestone shape. Conclusion YSTLF and its active component RD could improve the EMT induced by high glucose in HK-2 cells，the mechanism of which may be related to SOCS1 protein and ZEB1 protein.

R965

国家重点研发计划项目 （2020YFE0201800）；河南省重点研发计划项目 （221111520300）；河南省高校科技创新人才支持计划项目 （22HASTIT048）；河南省高等学校青年骨干教师项目 （2021GGJS081）；河南省中医药科学研究专项 （2023ZXZX1048）