目的 基于磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B （PI3K/AKT） 通路探讨左归丸通过缝隙连接蛋白 43 （Cx43） 磷酸化改善卵巢衰老大鼠卵巢生殖干细胞 （OSCs） 干性的机制。方法 将 8 周龄雌性 SD 大鼠随机分为正常组、模型组、脱氢表雄酮 （DHEA） 组、左归丸组，每组 6 只。采用环磷酰胺腹腔注射 15 d 复制卵巢衰老大鼠模型。模型复制结束后，DHEA 组大鼠灌胃 DHEA 8.1 mg•kg-1，左归丸组大鼠灌胃左归丸 1.85 g•kg-1，每日 1 次，连续30 d。采用 HE 染色法观察大鼠卵巢组织病理变化及各级卵泡计数；ELISA 法检测大鼠血清抗缪勒管激素（AMH） 、卵泡刺激素 （FSH） 、雌二醇 （E2 ） 水平；Western Blot 法检测卵巢组织中相关蛋白 （PCNA、MVH、Oct4、Cx43、p-Cx43、EGFR、AKT、p-AKT） 的表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠体质量明显下降 （P＜0.05） ，卵巢湿质量明显降低 （P＜0.05） ，始基卵泡数显著减少 （P＜0.01） ；血清 FSH 水平显著升高 （P＜0.01） ，E2、AMH 水平呈下降趋势（P＞0.05）；卵巢组织中 Oct4、MVH、PCNA、EGFR、p-AKT/AKT、p-Cx43（Ser368） /Cx43、Cx43 蛋白表达水平均明显降低 （P＜0.05，P＜0.01） 。与模型组比较，左归丸组大鼠体质量明显升高 （P＜0.05） ，卵巢湿质量、卵巢指数均显著升高 （P＜0.01） ，始基卵泡数显著增加（P＜0.01）；血清 E2 水平明显升高 （P＜0.05） ；卵巢组织中 Oct4、MVH、PCNA、EGFR、p-AKT/AKT、p-Cx43 （Ser368） /Cx43、Cx43蛋白水平表达均显著升高 （P＜0.05，P＜0.01） 。结论 左归丸可能通过维持 OSCs 干性改善卵巢衰老，其作用机制与 PI3K/AKT 信号通路及缝隙连接蛋白磷酸化相关。

Objective To investigate the mechanism of Zuogui Pills （ZGP） on improving the stemness of ovarian germline stem cells （OSCs） in ovarian aging rats through the gap junction protein connexin 43 （Cx43） phosphorylation based on the phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B PI3K/AKT pathway. Methods Eight- week-old female SD rats were randomly divided into control（CON），model（cyclophosphamide，CTX），ZGP and dehydroepiandrosterone（DHEA） groups，six rats in each group. CTX was injected intraperitoneally for 15 days to establish a model for ovarian aging，and then ZGP （1.85 g•kg-1） or DHEA （8.1 mg•kg-1） was administered by gavage once daily for 30 days. Follicle count at different stages and pathological changes of ovarian tissues were observed by HE staining. ELISA was used to detect serum levels of anti-mullerian hormone （AMH），follicle-stimulating hormone （FSH），and estradiol （E2 ） . The expression levels of related proteins （PCNA，MVH，Oct4，Cx43，p-Cx43，EGFR，AKT、p-AKT） in ovarian tissue were detected by Western Blot. Results Compared with the CON group，rats in CTX group had significantly reduced body mass（P＜0.05） and ovarian mass（P＜0.05）. The number of primordial follicles decreased significantly （P＜0.01）. Serum FSH level increased remarkably（P＜0.01），while AMH and E2 levels showed a downward trend （P＞0.05）. The protein expressions of Oct4，MVH，PCNA，EGFR，p-AKT/AKT，p-Cx43（Ser368）/Cx43 and Cx43 in ovarian tissue were obviously decreased（P＜0.05，P＜0.01）. Compared with the model group，the body mass of rats in ZGP group was significantly increased（P＜0.05），as well as ovarian mass and ovarian coefficient were remarkably increased （P＜0.01）. The number of primordial follicles were increased significantly （P＜0.01），and E2 level increased significantly （P＜0.05）. The protein expressions of Oct4，MVH，PCNA，EGFR，p-AKT/AKT，p-Cx43 （Ser368）/Cx43 and Cx43 in ovarian tissue were all increased significantly （P＜0.05，P＜0.01）. Conclusion ZGP may ameliorate ovarian aging by maintaining the stemness of OSCs. Its mechanism of actions is related to the PI3K/AKT signaling pathway and gap junction protein phosphorylation.

R285.5

国家自然科学基金项目 （82174418）；全国名老中医药专家传承工作室 （国中医药人教函 〔2022〕 75 号）；全国名中医工作室（国中医药人教发 〔2022〕 5 号）