摘要：目的对人诱导多能干细胞（人iPS细胞）分化成的类肝细胞的分化特征进行观察与鉴定性研究及对已成功分化的类肝细胞给予不同浓度的雷公藤冻干粉后检测肝功能多项指标，观察雷公藤对人iPS细胞诱导生成的类肝细胞模型肝功能的影响，初步探讨模型在中药毒性体外评价中的应用。方法通过细胞因子四步诱导分化方法，即加入激活素A（Activin A）、骨形态发生蛋白-4（BMP-4）、成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）、肝细胞生长因子（HGF）、制瘤素M（Oncostatin M）等细胞因子23天，将人iPS细胞分化成类肝细胞，使用细胞免疫荧光、RT-PCR、吲哚青绿（ICG）摄取等实验来鉴定类肝细胞的特异性功能。细胞免疫荧光方法检测限定性内胚层细胞特异性蛋白叉头框转录因子A2（FOXA2）和性别决定区Y框蛋白17（SOX17），肝细胞特异性蛋白甲胎蛋白(AFP)和白蛋白（ALB），肝细胞功能蛋白细胞色素P4503A4（CYP3A4）和α1 -抗胰蛋白酶（AAT），RT-PCR方法检测肝细胞特异性基因甲胎蛋白(AFP)、白蛋白（ALB）、细胞角蛋白8（CK8）、细胞角蛋白18（CK18）和细胞角蛋白19（CK19）是否表达做最终的验证，ICG摄取实验检测类肝细胞排泌功能。在成功诱导的类肝细胞 模型中加入雷公藤冻干粉（相当于生药量1，2，4，8 mg?mL-1）作用后，取培养液上清检测AST和ALT的活性、取细胞检测MDA的含量，GSH和SOD的活性。结果人iPS细胞经过23天的诱导成类肝细胞，RT-PCR检测结果显示细胞FOXA2和SOX17的mRNA在内胚层诱导阶段表达，在肝细胞分化与扩增阶段AFP和ALB表达，CYP3A4和AAT在肝细胞成熟阶段有表达；RT-PCR检测结果显示肝细胞特异性基因AFP、ALB、CK8、CK18和CK19在诱导完成的类肝细胞中表达；并且ICG摄取实验显示类肝细胞具有肝细胞的特异性排泌功能。加入不同剂量的中药雷公藤冻干粉后，检测AST和ALT活性，MDA浓度，GSH和SOD活性，经统计学检测，实验组相比于对照组具有显著性差异（P<0.01；P<0.05）结论细胞因子四步诱导法能诱导分化人iPS细胞成类肝细胞，加入不同剂量的雷公藤冻干粉检测AST、ALT、MDA、GSH和SOD肝功能相关指标与对照组相比具有统计学意义，提示干细胞诱导分化的类肝细胞可应用于中药肝毒性检测的体外初筛模型。

广东省自然科学基金项目（编号：2014A030313415）；广东省中医药科学院科学技术研究专项（编号：YK2013B2N10）